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PEI轉染手冊

更新時間:2020-12-16      點擊次數:79594

                                         PEI轉染手冊

 

轉染操作流程:
 
  1、細胞傳代:

轉染前24h內分離293T細胞至含10%胎牛血清的DMEM培養基 中進行傳代培養,接種密度如下:
         6孔板:0.5x106細胞
         10cm培養皿:4.0x106細胞
         15cm培養皿:9.0x106細胞

2、轉染

轉染前將所有試劑置于室溫。

2.1質粒DNA的稀釋

在無菌試管中,用無血清的DMEM W / O酚紅培養基(濃度為10%)稀釋質粒DNA(ug)。病毒包裝體(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重組質粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
       

6孔板:200ul+3ug的DNA
        10cm培養皿:1ml+7-8ug的DNA
        15cm培養皿:2ml+11-12ug的DNA

   2.2 轉染復合體形成

將PEI(1ug/uL)加入已稀釋的總DNA中,PEI與DNA(ug)的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
      

 6孔板:9ul PEI復合體(1ug/ul)=9ug
        10cm培養皿:21ul PEI復合體(1ug/ul)=21ug
        15cm培養皿:33ul PEI復合體(1ug/ul)=33ug
將添加到細胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。


4、收獲轉染細胞

轉染后48小時內收獲轉染細胞/或病毒上清。
 
試劑的配制:
PEI(1ug/ul)
1、將無內毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI,冷卻到室溫。
2、調整pH值至7.0,用0.22um的濾器過濾消毒,分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃

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線性聚乙烯亞胺 分子量25000

100mg

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