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bmgrp BI-20032說明書

更新時間:2020-12-15      點擊次數(shù):1511

 bmgrp BI-20032說明書

oLAB (Anti-Oxidized LDL Autoantibodies) ELISA | BI-20032

 oLAB(抗氧化的LDL自身抗體)ELISA | BI-20032

 抗氧化的LDL自身抗體ELISA(oLAB)亮點:

  • 樣本量小
  • 總孵育時間僅2小時15分鐘
  • 包含2個控件
  • CE標記–在歐盟用于IVD

 

分析特征

  • 方法

    間接ELISA,HRP / TMB,12×8孔可分離試紙

  • 樣品類型

    血清

  • 樣品量

    50微升/孔

  • 測定時間

    1.5小時/ 30分鐘/ 15分鐘

  • 靈敏度

    48毫升/毫升

  • 標準范圍

    0 – 1,200 mU / ml

  • 特異性

    抗氧化的LDL自身抗體

  •  

    中間運行(n = 5):≤8%CV

    批量分析(n = 8):≤4%CV

  • 采用

    CE標記–在歐盟用于IVD

產(chǎn)品詳情

 

抗氧化的LDL自身抗體產(chǎn)品概述

抗氧化LDL自身抗體(oLAB)免疫分析是2小時15分鐘的96孔間接ELISA,用于定量測定血清中的抗氧化LDL自身抗體。

抗氧化的LDL自身抗體的測定原理

抗oxldl抗體ELISA試劑盒是一種間接酶免疫法,用于定量測定血清樣品中的抗氧化LDL自身抗體。

一步,將預先稀釋的標準品/對照品/樣品移入微量滴定條的孔中,并預先用氧化的LDL抗原包被。標準品/對照/樣品中存在的抗氧化LDL自身抗體與孔中預包被的抗原結(jié)合。在去除所有非特異性未結(jié)合物質(zhì)的洗滌步驟之后,將綴合物(單克隆抗人IgG-HRP)移入孔中,并與抗氧化的LDL自身抗體發(fā)生反應。
在另一個洗滌步驟之后,將底物(TMB,四甲基聯(lián)苯胺)吸移到孔中。底物的酶催化顏色變化與樣品中存在的抗氧化LDL自身抗體的數(shù)量成正比。使用標準酶標儀可以檢測到這種顏色變化。直接從劑量響應曲線確定樣品中抗氧化的LDL自身抗體的濃度。

抗氧化的LDL自身抗體典型標準曲線

下圖顯示了oxldl分析試劑盒的典型標準曲線。 

oLAB ELISA典型標準曲線

抗氧化的LDL自身抗體ELISA試劑盒組件     

內(nèi)容

描述

數(shù)量

盤子

條帶固定器中氧化的LDL預涂層微量滴定條,包裝在帶干燥劑的鋁袋中

12 x 8測試

膨脹

未經(jīng)涂層的微量滴定板,用于樣品預處理

12 x 8孔

洗車場

濃縮洗滌緩沖液20倍,自然蓋

1 x 50毫升

性病

標準1-6(0; 0.62; 1.25; 2.5; 5; 10μg/ ml),抗氧化LDL IgG抗體,白色帽蓋,可以使用

6 x 500微升

CTRL鍵

對照品A和B,黃色瓶蓋,準備使用,濃度請參見標簽

2 x 500微升

ASYBUF

分析緩沖液,紅色蓋帽,準備使用

1 x 60毫升

康杰

結(jié)合物(單克隆抗人IgG-HRP),琥珀色帽,可以使用

1 x 13毫升

潛艇

基材(TMB解決方案),藍蓋,可以使用

1 x 13毫升

停止溶液,蓋上白帽,準備使用

1 x 7毫升

 

儲存說明: oLAB ELISA試劑盒中的所有試劑在4°C(2-8°C)的溫度下均穩(wěn)定,直到每種試劑標簽上標明的有效期為止。

 

 

樣品收集與儲存

血清適合用于此oxldl分析試劑盒。我們建議對所有樣品,標準品和質(zhì)控品進行重復測量。列出的樣品收集和儲存條件旨在作為一般準則。

血清

在標準化的血清分離管(SST)中收集靜脈血樣。讓樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘。根據(jù)試管制造商的使用說明離心分離。立即測定采集的樣品,或等分試樣并保存在-25°C或更低的溫度下。脂血或溶血的樣品可能會產(chǎn)生錯誤的結(jié)果。樣品解凍不要超過四次。

試劑準備

洗滌緩沖液

1。

使WASHBUF濃縮液達到室溫。緩沖液濃縮物中的晶體將在室溫(18-26°C)下溶解。

2。

將WASHBUF濃縮液按1:20的比例稀釋,例如50 ml WASHBUF + 950 ml蒸餾水或去離子水。進行測定時僅使用稀釋的WASHBUF。

稀釋的WASHBUF在4°C(2-8°C)下可以穩(wěn)定長達一個月。 

樣品制備

將樣品置于室溫并輕輕混合樣品,以確保樣品均勻。我們建議對所有樣品進行重復測量。

抗氧化的LDL自身抗體測定方案

在開始測定之前,請閱讀整個方案。

1。

使樣品和試劑達到室溫(18-24°C)。

2。

在協(xié)議表上標記STD / CTRL / SAMPLE(標準/對照/樣品)的位置。

在預稀釋板中

注意:所有STD / CTRL / SAMPLE(標準品/對照品/樣品)都必須以1:55的終稀釋度使用(預稀釋度1:5 +稀釋度1:11)。將隨附的DILPLATE(未涂布的微量滴定板)用于1:5的預稀釋步驟。

1。

移液200 µl ASYBUF(測定緩沖液)到未包被的微量滴定板的適當孔中。。

2。

將50 µl STD / CTRL / SAMPLE(標準品/對照品/樣品)加入各自的孔中,混合均勻(= 1:5稀釋)。

注意:預稀釋的物質(zhì)必須在15分鐘內(nèi)用于測定。

 

在預涂板中

1。

從鋁袋中取出微量滴定條。將未使用的干燥劑帶在4°C的鋁袋中存放。膠條在標簽上標明的有效期限之前都是穩(wěn)定的。

2。

移取200 µl ASYBUF(測定緩沖液,紅色蓋帽)到每個孔中,包括空白。

3。

將20 µl 1:5的STD / CTRL / SAMPLE稀釋液分別加入各孔中。輕輕旋轉(zhuǎn)。

注意:必須在15分鐘內(nèi)完成將預稀釋的STD / CTRL / SAMPLE轉(zhuǎn)移到預涂的微量滴定條中。使用多通道移液器。

4。

蓋緊板并在37°C下孵育1.5小時。

5,

用300 µl稀釋的WASHBUF(洗滌緩沖液)吸取并洗滌孔4次。后一次洗滌后,用一塊毛巾強力拍打板將剩余的WASHBUF取出。

6。

除空白外,向每個孔中加入100 µl CONJ(結(jié)合物,琥珀色帽)。

7。

蓋緊并在室溫(18-24°C)下孵育30分鐘。

8。

抽吸并用300 µl稀釋的WASHBUF洗滌孔4次。后一次洗滌后,用一塊紙巾強力拍打板,以清除殘留的WASHBUF。

9。

在每個孔中加入100 µl SUB(底物,藍色蓋)。

10。

在黑暗中于室溫下孵育15分鐘。

11。

在每個孔中加入50 µl STOP(終止溶液,白色蓋)。輕輕旋轉(zhuǎn)。

12

如果可用,立即在參考630 nm的450 nm處測量吸光度。

計算結(jié)果

從所有其他值中減去為空白獲得的吸光度讀數(shù)。使用能夠生成四參數(shù)對數(shù)(4-PL)擬合的可商購軟件從標準值構(gòu)建標準曲線。或者,將標樣在x軸上的濃度相對于每種標樣在y軸上的平均吸光度作圖,并通過圖中的點繪制佳擬合曲線。除4-PL以外的曲線擬合算法尚未得到驗證,用戶需要對其進行評估。

從標準曲線獲得樣品濃度。光密度(OD)值超過標準范圍高點的樣品可以進一步稀釋。計算樣品的終濃度時,必須考慮使用1:5以外的樣品稀釋液。

套件隨附的質(zhì)量控制協(xié)議顯示了每個套件終版本QC的結(jié)果。客戶獲得的光密度數(shù)據(jù)可能會受到各種影響,包括在整個保質(zhì)期內(nèi)正常降低信號強度。但是,只要濃度高的標準品的光密度為1.00或更高,并且CTRL的值在目標范圍內(nèi)(參見標簽),這就不會影響結(jié)果的有效性

 

 

抗氧化的LDL自身抗體

氧化的低密度脂蛋白(oxLDL)被認為在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起關鍵作用。oxLDL在巨噬細胞和平滑肌細胞中的積累會導致泡沫細胞形成,這是疾病的一步。可以將抗氧化修飾的LDL的自身抗體用作能始終反映體內(nèi)發(fā)生的氧化過程的參數(shù)。實際上,已經(jīng)在患有冠狀動脈疾病的患者的血流中檢測到針對oxLDL的自身抗體水平升高。此外,近的研究表明,針對oxLDL的自身抗體與頸動脈粥樣硬化的進展之間存在相關性。在諸如先兆子癇和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等各種疾病中,oLAB的血清濃度也有所增加。
oLAB的臨床應用概述已經(jīng)發(fā)布。

  • 心血管疾病

    • 動脈粥樣硬化(Bornaun等人,2017; de Freitas等人,2018; Pawlak等人,2012; Shoji等人,2003; Stanek等人,2018)
    • 冠狀動脈疾病(Faviou等,2005; Miller等,2003)
    • 心肌梗塞(Huang et al。,2013)
    • 中風(Ciancarelli et al。,2012)
  • 其他

    • 急性敗血癥(Al-Banna和Lehmann,2013年)
    • 先兆子癇(Arifin et al。,2017)

 

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